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技术|常见组织取材包埋方向及染色
　
 

技术|常见组织取材包埋方向及染色


动物组织取材是做后续病理染色或者分子检测实验的第一步，也是非常关键的一步。取材之后要进行有效的固定，之后再做石蜡包埋和切片以及后续实验。对于组织的固定，我们之前有较详细的介绍。现在介绍组织取材以及切片方向的选择和常见的病理特殊染色。




一

取材整体注意事项


1. 取材过程中，器械不能对标本有物理损伤；

2. 新鲜标本取下来第一时间固定，组织表面若有血液，先用pbs或生理盐水把血液漂洗干净，再固定；

3. 病理实验取材时，组织厚度不宜超过0.5cm，长宽不宜超过1.5cm；

4. 固定时，容器不能太小，标本不能被容器挤压，固定液要占容积的三分之二以上；

5. 像肺等易漂浮组织应盖上纱布或者是药棉，有空腔的组织如胃，膀胱等要切开固定；

6. 固定时，应该先倒入固定液，再放入组织；

7. 针对特殊组织器官的固定液的选择：比如眼球专用固定液，脂肪专用固定液；


二

常见组织取材、包埋方向及染色选择


对于一种特定组织的包埋切片方向，可以观察到不同的组织内部结构，因此，很有必要要弄清楚不同切面可以观察到哪些结构以便于后续的实验和研究检测。下面介绍几种常见组织的包埋切片方向和特殊染色方法。


1大脑（取材 包埋 特殊染色）

1.1 取材

建议剥离脑组织之前动物最好进行4%多聚甲醛固定液进行灌注固定

（1）脑组织较软，且细胞成分不易保留；

（2）固定后，取脑操作时，可减少脑组织的损伤；

（3）脑组织内血液都在，后续染色或者IHC可去除背景影响；

注意事项：用多聚甲醛灌注过后的动物组织都不能用于提RNA，蛋白等做PCR,WB和elisa生化等检测。

1.2 包埋切片方向

冠状面--分别观察前额叶皮层或纹状体或海马、丘脑、下丘脑或海马最大面、黑质等的典型结构

矢状面--同时观察嗅球、皮层、纹状体、海马、小脑等

观察肿瘤细胞在脑组织内的分布建议此切面

水平面--可同时观察嗅球、皮层、纹状体、海马、脑干、小脑等

1.3 大脑特殊染色（参考）

1.3.1 HE染色

  1. 染色目的及应用--观察脑组织病理学变化

  2. 组织病理学描述--梗死区脑组织疏松水肿，毛细血管扩张充血，神经元空泡变性，部分神经元固缩呈三角形，尼氏体数目减少，胶质细胞增生

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

1.3.2 TTC染色

  1. 染色目的及应用--显示脑组织缺血梗死部位，可测量梗死区面积大小

  2. 组织病理学描述--坏死神经元出现明亮绿色荧光

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

1.3.3 FJB荧光染色

  1. 染色目的及应用--观察脑组织坏死神经元

  2. 组织病理学描述--正常组织呈红色，梗死区呈苍白色

  3. 标本准备方法--新鲜组织或者-800℃冷冻组织切成2mm组织块染色

1.3.4 尼氏染色

  1. 染色目的及应用--显示神经元内尼氏体，反应神经元的状态

  2. 组织病理学描述--神经元内的尼氏小体深蓝色颗粒，细胞核淡蓝色，梗死区尼氏体数目减少

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

1.3.5 镀银染色

  1. 染色目的及应用--显示神经元纤维情况

  2. 组织病理学描述--神经轴突，神经细胞内原纤维，神经原纤缠结，

    老年斑及树突呈黑色，背景金黄色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

2
心脏（取材 包埋 特殊染色）

2.1 包埋切片方向


心底心耳下部横切
--观察主动脉瓣和主动脉窦

横切心尖--观察左右心室

平行心耳纵切--观察四个腔：左右心房和左右心室

2.2 心脏特殊染色（参考）

2.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用--观察心肌组织病理学变化

  2. 组织病理学描述--梗死区疏松水肿，毛细血管扩张，炎性细胞浸润，进一步发展坏死的肌纤维被疏松纤维结缔组织所取代，梗死灶边缘散在存活的心肌细胞肥大，成纤维细胞增生，大面积胶原纤维沉积，以I、III型胶原纤维为主，纤维瘢痕形成

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定石蜡包埋切片

2.2.2 WGA麦芽凝集素荧光染色

  1. 染色目的及应用--观察心肌细胞膜完整性

  2. 组织病理学描述--心肌细胞膜呈现明亮绿色荧光

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定石蜡包埋切片

2.2.3 Masson染色

  1. 染色目的及应用--观察心肌胶原纤维沉积情况

  2. 组织病理学描述--胶原纤维蓝色，心肌红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定石蜡包埋切片


2.2.4 
天狼星红染色


  1. 染色目的及应用--观察心肌胶原纤维沉积情况

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维红色，心肌黄色；偏振光显微镜下，I型胶原红黄色，III型胶原绿色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定石蜡包埋切片

2.2.5 普鲁士蓝染色

  1. 染色目的及应用--观察心肌组织内铁沉积情况

  2. 组织病理学描述--有铁离子富集区呈蓝色，细胞核红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定石蜡包埋切片

2.2.6 TTC染色

  1. 染色目的及应用--观察心肌梗死情况及测量梗死区面积

  2. 组织病理学描述--梗死区苍白色，正常区红色

  3. 标本准备方法--新鲜组织或者-80℃冷冻组织切成2mm组织染色

3主动脉（取材 包埋 特殊染色）

3.1 包埋切片方向

水平切--主动脉弓切三个分支

横切--圆环状，观察血管内膜、中膜、外膜及斑块

纵切--长条状，切面长可增加切到斑块等的几率

3.2 主动脉特殊染色（参考）

3.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用--观察血管病理学变化

  2. 组织病理学描述--巨噬细胞源性泡沫细胞（巨噬细胞吞噬脂质）聚集于动脉壁，泡沫细胞体积较大，胞质内大量小空泡。可见细胞外基质蛋白聚糖和少量炎症细胞浸润。病程进一步发展，血管壁粥样斑块内脂质面积扩大，胆固醇结晶形成，斑块表面有泡沫细胞聚集或胶原纤维，平滑肌细胞，少量弹性纤维及蛋白聚糖形成的纤维帽。中膜变薄，平滑肌细胞减少或者消失，钙化小粒散在分布或灶状钙化灶形成，外膜毛细血管新生，纤维结缔组织增生及炎性细胞浸润

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

3.2.2 大体组织油红O染色

  1. 染色目的及应用--大体观察血管内壁脂肪斑块的情况，可以统计斑块的数量及测量斑块的面积

  2. 组织病理学描述--脂肪斑块呈红色

  3. 标本准备方法--整个血管组织纵向剖开4%多聚甲醛固定

3.2.3 油红O染色 

  1. 染色目的及应用--镜下观察血管内壁脂肪斑块的情况

  2. 组织病理学描述--脂肪斑块呈红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后冰冻切片

3.2.4 Movat五色法染色

  1. 染色目的及应用--镜下同时观察血管内壁弹力纤维、蛋白聚糖、胶原纤维、网状纤维等情况

  2. 组织病理学描述--蛋白聚糖蓝色，肌纤维浅红色，纤维素深红色，弹力纤维和细胞核紫黑色，胶原蛋白和网状纤维胆固醇等黄色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

3.2.5 EVG染色

  1. 染色目的及应用--镜下观察血管弹力纤维，胶原纤维的情况

  2. 组织病理学描述--弹力纤维呈紫黑色，胶原纤维红色，其他黄色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

3.2.6 Von Kossa 染色

  1. 染色目的及应用--镜下观察血管壁钙盐沉积情况

  2. 组织病理学描述--钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

4肝脏（取材 包埋 特殊染色）

4.1 包埋切片方向

最大面--哪个切面都可观察到肝小叶，汇管区，血管等

4.2 肝脏特殊染色（参考）

4.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用--观察肝脏病理学变化

  2. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

4.2.2 油红O染色 

  1. 染色目的及应用--镜下观察肝组织内脂滴沉积情况，脂肪肝，酒精性肝病，重症肝炎，妊娠等

  2. 组织病理学描述--脂滴红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后冰冻切片

4.2.3 PAS染色

  1. 染色目的及应用--镜下观察肝组织内的肝糖原分布及变化，糖尿病，糖原累积症

  2. 组织病理学描述--糖原颗粒呈紫红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

4.2.4 Masson染色

  1. 染色目的及应用--观察肝脏内胶原纤维沉积情况，肝纤维化，肝硬化，肝静脉闭塞性病变

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维蓝色，肌纤维细胞红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

4.2.5 Gomori网状纤维染色

  1. 染色目的及应用--显示肝窦网状支架，观察肝组织内网状纤维的分布及变化，肝炎，肝硬化，肝结节性病变及肿瘤

  2. 组织病理学描述--网状纤维是正常干细胞与肝窦间的主要支架，在一个肝小叶内网状纤维密集表示肝细胞萎缩或坏死，网状纤维的变化能灵敏的反映出肝细胞的损伤，增生及纤维化程度，网状纤维呈黑色丝网状

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

4.2.6 天狼星红染色

  1. 染色目的及应用--观察肝脏内胶原纤维沉积情况，肝纤维化和肝硬化

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维红色，肝细胞黄色；偏振光显微镜下I型胶原红黄色，III型胶原绿色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

5肾脏（取材 包埋 特殊染色）

5.1 包埋切片方向

蚕豆状最大面--常规包埋面，同时观察皮质（肾小球 肾小管）髓质，肾盂

横切--切面小，同时观察皮质（肾小球 肾小管）髓质

注意事项：固定前要把肾表面的包被膜去掉，否则会影响固定效果

5.2 肾脏特殊染色（参考）

5.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用--观察肾脏病理学变化

  2. 组织病理学描述--肾小球系膜增生，进一步发展肾小球纤维化硬化，肾小管基膜增厚，肾小管萎缩，肾小管间质纤维化

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

5.2.2 PASM染色 

  1. 染色目的及应用--显示肾小球肾小管基底膜和系膜

  2. 组织病理学描述--肾小球基底膜和系膜呈棕黑色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

5.2.3 PAS染色

  1. 染色目的及应用--显示肾小球肾小管基底膜和系膜

  2. 组织病理学描述--基底膜和系膜呈紫红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

5.2.4 Masson染色

  1. 染色目的及应用--观察肾脏内胶原纤维沉积情况

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维蓝色，肌纤维上皮细胞红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

5.2.5 刚果红染色

  1. 染色目的及应用--显示肾小球或血管等淀粉样蛋白

  2. 组织病理学描述--淀粉样蛋白呈均质红染状物质

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

5.2.6 天狼星红染色

  1. 染色目的及应用--观察肾脏内胶原纤维沉积情况

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维红色，上皮细胞黄色；偏振光显微镜下I型胶原红黄色，III型胶原绿色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

6肺（取材 包埋 特殊染色）

6.1 包埋切片方向

最大面--常规包埋面，观察肺泡、气管血管等

肺门横切--主要观察气管、肺动脉、肺静脉、三个环

6.2 肺特殊染色（参考）

6.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用--观察肺病理学变化

  2. 组织病理学描述--肺泡隔增粗，大量胶原纤维沉积

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

6.2.2 PAS染色

  1. 染色目的及应用--显示支气管上皮杯状细胞变化

  2. 组织病理学描述--杯状细胞呈紫红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

6.2.3 Masson染色

  1. 染色目的及应用--观察胶原纤维沉积情况

  2. 组织病理学描述--镜下胶原纤维蓝色，肌纤维上皮细胞红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

6.2.4 天狼星红染色

  1. 染色目的及应用--观察胶原纤维沉积情况

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维红色，上皮细胞黄色；偏振光显微镜下I型胶原红黄色，III型胶原绿色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

7肠道组织（取材 包埋 特殊染色）

7.1 包埋切片方向

横切--常规包埋面，圆环状同时换擦上皮、粘膜、肠绒毛、肌层

纵切--长条状，切面长可增加切到炎症和溃疡等几率

注意事项：如果想观察整个肠道粘膜情况，取整段肠直接固定。

7.2 肺特殊染色（参考）

7.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用-观察肠组织形态结构及病理学变化，可测量肠绒毛高度隐窝高度

  2. 组织病理学描述--溃疡部位上皮细胞坏死崩解形成明显的溃疡灶，大量炎症细胞浸润根据病变成都不一侵及消化道不同层次，固有层及粘膜下层疏松水肿，毛细血管扩张充血

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

7.2.2 PAS染色

  1. 染色目的及应用--显示消化道内杯状细胞，肠腔内的黏液层

  2. 组织病理学描述--杯状细胞呈紫红色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

7.2.3 阿利新蓝染色

  1. 染色目的及应用--显示消化道内酸性粘液细胞

  2. 组织病理学描述--酸性粘液细胞蓝色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

7.2.4 AB-PAS染色

  1. 染色目的及应用--同时显示消化道内酸性和中性粘液物质

  2. 组织病理学描述--中性粘液物质紫红色，酸性粘液物质蓝色，混合型粘液物质蓝紫色（酸性偏多）或紫蓝色（中性偏多）

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

7.2.5 肥大细胞染色

  1. 染色目的及应用--显示消化道内肥大细胞分布及数量变化

  2. 组织病理学描述--肥大细胞胞浆紫红色，有时可观察到肥大细胞脱颗粒现象，紫红色的细胞颗粒脱失散落到肥大细胞周围

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

8皮肤组织（取材 包埋 特殊染色）

8.1 包埋切片方向

横切全层--观察表皮 真皮 皮下组织

注意事项：有损伤部分截取损伤和正常交接部位横切

8.2 皮肤特殊染色（参考）

8.2.1 HE染色

  1. 染色目的及应用-观察皮肤病理学变化

  2. 组织病理学描述--损伤部位皮肤表皮坏死脱落形成明显的炎性反应带，真皮部位胶原纤维缺失，结缔组织疏松水肿，大量炎性细胞弥漫性分布，血管扩张，随着伤口愈合的过程会出现大量的肉芽组织，很多新生血管垂直于表皮生长

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片

8.2.2 EVG染色

  1. 染色目的及应用--观察弹力纤维，胶原纤维情况

  2. 组织病理学描述--弹力纤维呈紫黑色，胶原纤维红色，其他呈黄色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

8.2.3 Masson染色

  1. 染色目的及应用--观察胶原纤维生成情况

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维蓝色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

8.2.4 天狼星红染色

  1. 染色目的及应用--观察胶原纤维生成情况

  2. 组织病理学描述--白光显微镜下胶原纤维红色；偏振光显微镜下I型胶原红黄色，III型胶原绿色

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

8.2.5 肥大细胞染色

  1. 染色目的及应用--显示肥大细胞分布及数量变化

  2. 组织病理学描述--肥大细胞胞浆紫红色，有时可观察到肥大细胞脱颗粒现象，紫红色的细胞颗粒脱失散落到肥大细胞周围

  3. 标本准备方法--4%多聚甲醛固定后石蜡切片

以上介绍了几种常见组织的取材、包埋切片注意事项和几种特殊染色，由于版面原因，不能一一列举，如果有兴趣的同学和老师，可以添加18689437090微信，备注回复“病理”即可获得较为详细和的资料。   P.S. 本公众号提供的素材仅供学习参考不可用于其他商业用途。


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